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Es ist Nacht im Smithsonian in Washington, D.C. Die Museumsführer sind nach Haus gegangen, die Lichter sind gelöscht, die Schulkinder liegen längst in ihren Betten…doch geht irgendetwas Unglaubliches dort vor sich. Etwas, das den ehemaligen Nachtwächter Larry Daley in sein großartigstes, aufregendstes Abenteuer stürzt – die Geschichte wird erneut lebendig, von den weltberühmten Gemälden an der Wand über die Statuen der Vergangenheit bis hin zu den Raketen im Air & Space Museum.

Dabei hat Larry seinen schlecht bezahlten Job als Museumsnachtwächter mittlerweile eigentlich an den Nagel gehängt und ist ein erfolgreicher Geschäftsmann geworden. Es mangelt ihm an nichts – und doch scheint ihm etwas zu fehlen. Etwas, das ihn dahin zurücklockt, wo er die magischste und aufregendste Nacht seines Lebens verbracht hat: Zum New Yorker Museum of Natural History. Dort macht er eine beunruhigende Entdeckung. Seine treuen Museumsfreunde von damals gelten plötzlich als altmodisch. Sie warten in Kisten verpackt darauf, auf Nimmerwiedersehen im unendlichen Archiv des Smithsonian in Washington zu verschwinden.

Ihr Schicksal ist ungewiss – bis zu dem Moment, als Larry einen Notruf des Miniatur-Cowboys Jedediah erhält, der furchtbare Neuigkeiten hat. Versehentlich wurde auch ihr neues Zuhause zum Leben erweckt, inklusive des ägyptischen Herrschers Kahmunrah, der nach seinem dreitausendjährigen Schlaf besonders schlecht drauf ist. Gemeinsam mit drei der abscheulichsten Bösewichte der Geschichte – Iwan dem Schrecklichen, Kaiser Napoleon und Al Capone – will er die Armeen der Unterwelt auf das Museum (und danach auf die ganze Welt) loslassen.

Eilig reist Larry nach Washington, ist aber von der Situation heillos überfordert. Gut, dass ihm ein paar grandiose neue Freunde zur Seite stehen – vom brillanten Albert Einstein über den ehrenwerten Präsidenten Abraham Lincoln bis zu der unwiderstehlichen Amelia Earhart, die Larrys Abenteuerlust und Lebensfreude neu entfacht. Gemeinsam mit seinen alten Freunden Präsident Teddy Roosevelt, Octavius, Sacajawea, Attila dem Hunnen und den Neanderthalern gibt Larry alles, um die Bösen zu besiegen und die Ordnung im Museum wiederherzustellen ...

Bild: © 20th Century Fox Home Entertainment